La obtención de datos instrumentales de orden superior resueltos por adecuados algoritmos matemáticos permite la cuantificación de analitos en matrices complejas, aun en presencia de otros componentes no esperados y potencialmente interferentes; evitando o minimizando así tediosos tratamientos previos para la eliminación de interferencias. En el presente trabajo se desarrolló un método destinado a determinar la concentración de atenolol, en una matriz compleja como la orina, basado en la obtención de datos espectrofluorimétricos de orden dos, resueltos con asistencia quimiométrica por un algoritmo denominado cuadrados mínimos parciales desdoblados combinados con bilinealización residual (U-PLS/RBL). El atenolol es naturalmente fluorescente pero su determinación en orina se complica por la complejidad de la matriz, impidiendo el uso de la espectroscopía convencional. De hecho existen compuestos inesperados que interactúan con el atenolol ejerciendo un “efecto de matriz”; efecto que varía de muestra en muestra y puede cambiar la señal del analito en forma e intensidad.