Los plaguicidas son sustancias que se usan frecuentemente en mezcla para controlar plagas, sin embargo, no son específicos sólo para ellas y también actúan sobre aquellos seres vivos para los cuales no fueron creados, como el hombre. Es por ello que aquí se describe la metodología analítica desarrollada para determinar la presencia de una mezcla de plaguicidas de familias químicas diferentes en una matriz de suero humano, procedente de floricultores de la zona de Villa Guerrero, México. Los plaguicidas determinados fueron metamidofos, quintoceno, metomilo y tiabendazol. Se utilizó una extracción en fase sólida para el pre-tratamiento del suero con acetonitrilo como disolvente de elusión y los extractos obtenidos se analizaron por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas. Esta metodología constituye un aporte para la búsqueda de datos que contribuyan a evaluar el riesgo a la salud por exposición ocupacional a mezcla de plaguicidas.